Quels sont les inconvénients de HPLC?
Chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) est une technique de laboratoire utilisée pour séparer et identifier des composés. Il est un type de Chromatographie sur colonne qui repose sur des polarités différentes de composés dans une solution afin de les séparer. HPLC diffère de Chromatographie sur colonne standard, car il utilise la pression pour forcer la solution à travers la colonne plus rapidement, et produit donc plus rapide, et parfois plus précis, des résultats. Le but est de séparer des composés dans la colonne et de les faire sortir séparément.
coélution
En raison de la vitesse de HPLC et le recours à des polarités différentes de composés, les deux composés ayant une structure similaire et des polarités peuvent sortir de l`appareil de chromatographie en même temps ou presque en même temps. Ceci est connu comme co-élution. Coélution rend de déterminer exactement quelle partie du mélange élué à quel point difficile.
adsorbées composés
HPLC utilise généralement une colonne de verre remplie de billes de matériaux différents. Les mélanges étant forcés à travers la colonne ont des produits chimiques qui se lient avec des forces différentes sur les billes. La force de la liaison, qui dépend de la similarité de polarité, détermine combien de temps le produit chimique se lie à la bille avant d`être libéré. Certains composés se lient si fortement qu`ils sont essentiellement jamais libérés des billes dans la colonne et ne sont jamais mesurées dans la solution sortant de la colonne.
Coût
des techniques de séparation de laboratoire typiques impliquent le développement d`un dosage ou procédé de séparation, puis application de cette analyse pour séparer les composés individuels à partir d`une solution. Cependant, cela se traduit généralement par de multiples solutions qui doivent aussi subir des procédures, ce qui conduit à une augmentation exponentielle de la complexité. Bien que HPLC peut souvent simplifier et accélérer ce processus, le coût de développement d`un appareil HPLC peut devenir énorme. Le développement d`un appareil de HPLC, bien que beaucoup plus efficace, est beaucoup plus coûteux que le développement d`autres dosages pour la séparation de composés. Cela le rend pas financièrement viable pour de nombreux petits laboratoires privés.
Complexité
HPLC est non seulement utilisé pour séparer des composés simples, il est également utilisé pour isoler les protéines spécifiques à partir d`un mélange cellulaire. Dans ce cas, les perles dans la colonne sont généralement recouvertes d`un anticorps spécifique à la protéine dont vous avez besoin de collecter. Les protéines se lient les anticorps et la solution restante est passé à travers la colonne, puis les protéines sont libérés en utilisant une autre solution et recueilli. Cela nécessite un technicien hautement qualifié pour surveiller la colonne en tout temps et assurez-vous que le processus fonctionne exactement comme prévu.