Comment Dépanner un HPLC double-crête
Chromatographie en phase liquide à haute performance ou HPLC, est une technique utilisée pour séparer les composés à partir d`une solution mixte. Un tube métallique rempli de billes de silice, appelée colonne de HPLC, est utilisée pour séparer la solution avant qu`elle ne soit détectée par le détecteur de HPLC. Un double pic du détecteur de lecture implique généralement que quelque chose d`autre contamine le système. La plupart du temps, le problème se trouve dans la colonne HPLC.
Déterminer quel type de solvant est injecté dans le système HPLC. Si le solvant est plus forte que la phase mobile liquide qui passe à travers, le fractionnement de pointe peut se produire. Une solution simple est d`utiliser le même solvant dans la phase mobile en tant que solvant dans l`échantillon. Si le problème persiste, la colonne HPLC peut être contaminée.
Laver la colonne par pompage 100 pour cent du méthanol ou de l`acétonitrile bien que le système HPLC pendant au moins 15 minutes. Cela permettra d`éliminer les matériaux fortement attachés liés à la colonne. Inverser la colonne et effectuer le même mode opératoire avec le même solvant. Ce procédé permet de supprimer toute matière particulaire qui peut être encombrer le frittage d`un filtre situé à l`avant de la colonne. Si la chromatographie continue à afficher doubles pics, la colonne a été encrassé avec des contaminants solides.
Avec la colonne dans le sens inverse, la pompe 25 ml d`eau à 1 ml par minute. Ensuite, rincer la colonne avec 25 ml d`isopropanol, le chlorure de méthylène et de l`hexane successivement. Reconnecter la colonne dans la direction appropriée et rincer la colonne avec 25 ml de solvant de phase mobile. Si le double pic persiste, remplacer la colonne.